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血液病诊断常用方法

标签: 血液病诊断方法

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一、血细胞化学染色
酸性磷酸酶(ACP)染色
[原理]
在酸性条件下(pH值4.9),磷酸酶将作用液中的基质(甘油磷酸钠)水解,产生磷酸,进而与铅作用生成磷酸铅沉淀于细胞酶活性存在处,然后与硫化铵作用,生成黑色硫化铅沉淀。
[临床意义]
1.网状细胞、吞噬细胞、组织细胞和单核细胞此酶呈阳性反应。
2.毛细胞白血病时,毛细胞呈阳性反应,且不为L-酒石酸所抑制。
3.戈谢细胞ACP染色阳性,而尼曼-皮克细胞呈阴性。

过氧化物酶(POX)染色
[原理]
联苯胺反应显示POX的存在,当此酶活性存在时,它可将底物(H2O2)分解产生出新生态氧,进而使无色的联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝。
[临床意义]
用于鉴别急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病。POX主要存在于粒系细胞中,细胞越成熟,其反应越强。原始单核细胞呈阴性,幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性反应。淋巴系、巨核系、红细胞系各阶段细胞均呈阴性反应。

铁染色
[原理]
机体多余的铁以铁蛋白及含铁血黄素的形式储存,在幼红细胞中也有非血红素的含铁小粒。这些铁与铁氰化钾在酸性溶液中发生反应而呈蓝色。
[参考值]
1.细胞内铁:计算100个中幼红细胞、晚幼红细胞,计数阳性率,正常者30%;铁颗粒1-5粒,一般不超过10粒。
2.细胞外铁:观察网状内皮系统细胞的胞浆内或血岛内蓝色颗粒和小珠。正常见少数铁颗粒和小珠。
[临床意义]
是观察各种贫血患者体内铁的多少和骨髓利用情况,也是指导铁剂治疗的一个灵敏而可靠的指标。特别是铁粒幼细胞贫血形成特有的环形铁粒幼细胞,易与其他类型贫血区别。

中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色(钙-钴法)
[原理]
当细胞内的NAP活性存在时,在pH为9.2~9.5的碱性条件下,它可将作用液中的基质β-甘油磷酸钠水解,释出磷酸,进而与作用液中的钙离子结合,成为磷酸钙沉淀,再经过硝酸钴和硫化胺的作用,生成不溶性硫化钴,呈黑色沉淀定位于胞浆。
[临床意义]
1.正常人的NAP活性较低,阳性率平均为20%~40%。
2.感染、出血及类白血病反应,NAP活性显著增高,阳性率达90%~100%;粒细胞型白血病活性显著降低;淋巴细胞型白血病活性显著增高;单核细胞型白血病在正常范围内。再生障碍性贫血NAP活性增高;阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)则活性减低。

特异性酯酶(SE)染色
[原理]
SE基本上为粒细胞所特有,可将基质中的萘酚AS-D氯醋酸盐水解而产生萘酚AS-D,后者与重氮盐偶联生成不溶性有色沉淀定位于胞浆中。
[临床意义]
1.正常血细胞反应:SE在分化好的原始粒细胞可呈弱阳性反应,早幼粒细胞呈强阳性反应,SE活性不随粒细胞的成熟而增强。单核细胞呈阴性或弱阳性反应,其他细胞均呈阴性反应。
2.急性白血病类型的鉴别:急性粒细胞白血病时,原始粒细胞和早幼粒细胞的SE活性显著增强;急性单核细胞白血病时,原始单核细胞、幼稚单核细胞一般呈阴性反应;急性淋巴细胞白血病、急性巨核细胞白血病时,其原始、幼稚细胞均呈阴性反应。

非特异性酯酶(NSE)染色
[原理]
NSE是指作用于短链脂肪酸的酶。NSE水解基质液中α-醋酸萘酯而产生α-萘酚,后者与重氮盐偶联生成不溶性有色沉淀定位于胞质中。
[临床意义]
1.正常血细胞反应:NSE主要存在于单核细胞系,从原单细胞到成熟单核细胞逐渐增强。粒细胞一般呈阴性反应。
2.急性白血病类型的鉴别:急性单核细胞白血病时,NSE呈强阳性或阳性反应,但NSE活性能被氟化钠所抑制,称为氟化钠抑制试验阳性。急性粒细胞白血病时,有部分病例可是弱阳性或阳性反应,但其酶活性不被氟化钠抑制,即氟化钠抑制试验阴性。故本试验可以用于急性单核细胞白血病的诊断及其与急性粒细胞白血病的鉴别。

糖原染色(又称过碘酸-雪夫反应,PAS反应)
[原理]
含有乙二醇基的糖类,在过碘酸的作用下,经氧化而产生双醛基,醛基进而与碱性复红液(Schiff液)结合,使无色液体变成紫红色染料,并沉着于含有糖原的细胞或组织结构上。
[参考值]
正常人PAS反应的积分值<60。
1.红细胞系列的糖原反应及其诊断意义:正常人、再生障碍性贫血、巨幼红细胞贫血的幼稚红细胞均无阳性反应;溶血性贫血及隐性的慢性白血病的幼稚红细胞,偶而有弱阳性反应。红白血病、缺铁性贫血、地中海贫血的幼稚红细胞呈阳性反应。
2.急性粒细胞白血病的原始及早幼粒细胞的糖原一般呈阳性反应,但早幼粒胞浆内多呈弥漫性着色颗粒;急性淋巴细胞白血病有l/5~1/2呈阳性反应,并可见红色粗大颗粒,形成环状。而淋巴肉瘤细胞白血病及慢性淋巴细胞白血病,巨核细胞白血病的原始巨核细胞、幼稚巨核细胞,特别是小巨核细胞的糖原呈强阳性反应,弥漫于胞浆内。

二、血细胞图像定量检查

1、血细胞图像处理系统的组成:血细胞图像处理系统由高性能486型以上的微机为主机,配以CCD摄像机,图像采集卡,图像显示器,光电鼠标器以及带自动扫描平台的显微镜组成。
2、血细胞图像处理过程:整个图像处理过程分为两个阶段,即训练阶段和识别阶段。在训练阶段中,选取的白细胞样品为经过血液专家鉴定的已知细胞,经数字处理后,对每个白细胞提取最大限度的特征,以此作为判别的标准。在此基础上利用模式识别理论,根据分离能力的大小选择出少数最有效的特征,并使用这些入选的特征构成判别函数。在识别过程中,等待测的血细胞样品经数字化后,根据训练阶段的程度选出它们最有效特征,并由判别函数去判决各类细胞,最后得到结果。
  血细胞图像处理自动分类的特征提取是对细胞的定量描述,在细胞的自动识别全过程中占有非常重要的地位,它反映细胞类别间的差异,直接影响到分类系统的识别率。对白细胞而言,能提取的细胞特征和方式多样,其关键是寻找类别的可分离性为准则的最有效的不变特征参量。识别过程中所选用的特征不是越多越好,过多的特征会造成系统处理时间长和识别率下降。
  图像处理——白细胞自动分类不同于Coulter的VCS技术,也不同于TechnieonH-1的POX通道技术,它纯粹是细胞形态学人工智能模拟的新技术产物,在CT相当普及的今天,图像处理——血细胞自动分类正朝着临床应用迈进,将成为实验室必备仪器之一。

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